第七届北京罕见病学术大会暨2019京津冀罕见病学术大会征文（220)

北京大学第一医院儿科

王聪* 张琰琴* 王芳 邓海月 郭冀帆 李白虹 刘晓宇 丁方睿 李雪娟 丁洁

*王聪，张琰琴并列第一作者

通讯作者：丁洁

目的：USAG-1是一种分泌蛋白，既往研究发现USAG-1与多种肾脏疾病的发生发展相关。足细胞在肾脏疾病，尤其是蛋白尿性肾脏疾病的发生和进展中发挥着极其重要的作用，但USAG-1是否参与足细胞损伤及其分子机制尚不清楚。本研究通过体内外实验探讨USAG-1对足细胞的损伤作用及分子机制。

方法：1.首先应用PCR技术检测小鼠足细胞上是否存在USAG-1表达。2. 建立经典的PAN大鼠肾病模型，利用免疫荧光技术检测USAG-1在肾脏的分布及表达的改变，并进一步应用Western blot方法检测USAG-1及Wnt信号通路关键分子表达变化。3. 在体外，小鼠足细胞系过表达USAG-1，应用MTT检测细胞活力、Western blot方法检测足细胞特异蛋白nephrin表达变化、划痕实验检测细胞迁徙能力改变、免疫荧光技术检测细胞骨架改变。并且应用DKK1阻断Wnt信号通路后再次检测上述足细胞损伤指标的变化。

结果：在体外培养小鼠肾脏足细胞（MPC5）应用RT-PCR技术检测到USAG-1表达。在正常大鼠肾组织中，应用双重免疫荧光技术发现USAG-1和足细胞特异分子synaptopodin存在共定位关系，进一步证实了足细胞上存在USAG-1表达。在PAN大鼠中，应用免疫荧光和Western blot技术检测到肾小球USAG-1表达增加，同时检测到Wnt信号通路关键分子Wnt1、Active β-catenin表达上调。体外足细胞（MPC5）过表达USAG-1，应用MTT方法检测到足细胞活力降低，western blot技术检测到nephrin表达降低，划痕实验检测到细胞迁移能力减弱，免疫荧光技术检测到细胞骨架紊乱，应用DKK1阻断Wnt信号通路后，足细胞活力升高。

结论：本研究发现USAG-1表达增加可以导致足细胞损伤，并初步证明Wnt信号通路的激活是USAG-1导致足细胞损伤的重要分子机制。

关键字：蛋白尿；足细胞；USAG-1；Wnt信号通路

基金项目：国家自然科学基金（81400685）；儿科遗传性疾病分子诊断与研究北京市重点实验室（Z141107004414036)；国家重点研发计划精准医学研究重点专项“儿童罕见病的注册登记研究”（2016YFC0901505）