第八届北京罕见病学术大会暨2020京津冀罕见病学术大会征文（52)

1首都医科大学附属北京友谊医院科研实验中心

2北京市临床医学研究所

1李艳萌 1徐安健 1张伟 1吴立艳 1贾思雨 1周冬虎 1张蓓 1齐赛平

2贾继东 2黄坚

【目的】遗传性血色病(HH)是一种具有遗传异质性的全身性铁超载疾病，HFE p.C282Y纯合突变为欧美人群中血色病主要致病基因突变，但在中国人群中罕见。在我们之前的研究中，通过外显子组测序发现在中国原发性铁过载的病例中DENND3 p.L708V的突变频率发生较高，DENND3是小GTPase Rab12的激活物，进一步调节转铁蛋白受体（TFR）的降解。本研究主要探索DENND3 p.L708V在中国遗传性血色病中的频率及致病机制。

【方法】采用Sanger测序法分析DENND3 p.L708V突变的频率，进一步通过免疫组织化学方法检测DENND3 p.L708V突变的血色病病人的TFR2的定位改变。在体外实验中，我们构建了DENND3和DENND3 p.L708V突变载体，并转染Huh-7和HepG2两种细胞，在Holo-转铁蛋白处理下，分析Rab12、TFR2和hepcidin的表达，以及BMP/SMAD通路的参与情况。并通过免疫荧光法检测溶酶体标记物LAMP-1和TFR2的共定位情况来观察TFR2的降解。在体内实验中，我们构建了DENND3 及DENND3 p.L708V的腺相关病毒载体，通过尾静脉注射小鼠，检测Rab12、TFR2和hepcidin的表达，以及BMP/SMAD通路的调节情况。普鲁士蓝染色（铁染色）观察肝组织的铁沉积，并采用试剂盒检测小鼠血清铁和铁调素水平。

【结果】28例非亲属的原发性铁过载患者中，6例病人(6/28，21.4%)存在DENND3 p.L708V突变，其中纯合突变1例，杂合突变5例，并伴有TFR2的定位改变和表达下降。我们的体外实验发现，在DENND3 p.L708V突变的Huh-7和HepG2细胞中，Rab12的表达增加，TFR2于溶酶体中降解，BMP/SMAD通路和hepcidin下调。体内实验的结果进一步验证了这个结论，在DENND3 p.L708V突变的慢病毒注射小鼠中，相关调节指标发生了改变，进一步降低了铁调素水平，最终增加了肝组织的铁沉积和血清铁的浓度。

【结论】DENND3 p.L708V突变可能是中国遗传性血色病的一个新的致病机制。