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一例无先证者样本的先天性多发关节挛缩家庭致病基因筛查及胚胎植入前遗传学诊断

作者:张蔓丽 等 日期:2021-07-22 浏览量:576

第八届北京罕见病学术大会暨2020京津冀罕见病学术大会征文(132)

 1中国人民解放军总医院医学创新研究部出生缺陷防控技术研究中心

2中国人民解放军总医院妇产科

张蔓丽1 周红辉2马慜悦2 田亚平1李亚里2 张鑫悦2 李晓青2彭红梅2*卢彦平2*

*卢彦平和彭红梅为共同通讯作者

摘要

研究目的:为一例2次生育先天性关节挛缩(Arthrogryposis Multiplex Congenita,AMC)患儿并均已夭折的家庭查找致病基因,帮助该家庭获得健康后代;为其他无先证者的遗传病家庭再生育提供借鉴。


材料和方法:收集夫妻双方的外周肘静脉血,行全外显子测序,结合该家庭2名已逝先证者临床表型,对测序得到的基因位点突变信息进行筛选比对,确定致病基因突变位点;选取致病位点紧密连锁的SNP位点进行突变位点连锁分析;因已有2次剖宫产史,该夫妇要求行胚胎植入前诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)。采取常规控制性促排卵方案。取卵后行常规卵细胞浆内单精子注射( intracytoplasmic sperm injection,ICSI)授精。 于胚胎发育第5天或第6天取得胚胎滋养层细胞。利用多次退火环状循环扩增技术(multiple annealing and looping-based amplification cycles,MALBAC)对活检的细胞进行DNA扩增,选取该致病基因突变位点为野生型或杂合型的胚胎进行移植,并在孕中期、产后,利用羊水、脐带血等样本进行二代高通量测序及一代测序验证。


结果 根据该夫妻表述及1名已逝先证者就诊病历,结合OMIM相关病例报道,临床诊断该2名已逝先证者均为AMC;全外显子测序在夫妻双方分别发现1个ECEL1基因复合杂合突变,即ECEL1 , c.922C>T,p.(Gln308*)(女方)和ECEL1 , c.1742dup,p.(Ala583Argfs*12)(男方)。夫妻双方基因组二代高通量测序后CNV分析未见异常;促排卵后行ICSI,共获取囊胚11枚,行PGD。根据检测结果,第一次胚胎移植选取13号胚胎植入,失败。第二次胚胎移植选取8号胚胎(携带男方致病位点即ECEL1 , c.1742insT植入,成功受孕后于孕19周行羊膜腔穿刺术,取羊水验证胎儿仅携带ECEL1 , c.1742insT位点,该位点来源于男方,胎儿CNV及10M碱基以上的缺失和重复结果未见异常;胎儿出生后临床表型正常,脐带血验证结果与前一致;随访该男婴1年发育正常。


结论 利用全外显子测序技术,结合临床表型,可对无先证者样本的畸形儿家庭试行致病基因筛查,结合MALBAC技术及二代测序、基因连锁分析,有可能为此类家庭提供胚胎植入前诊断,避免再次孕育相同的畸形儿。


关键词   先天性关节挛缩  全外显子测序 无先证者 胚胎植入前诊断