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2例植物固醇血症及其家系临床特点及基因突变分析

作者:温文慧 等 日期:2018-09-11 浏览量:82

第六届北京罕见病学术大会暨2018京津冀罕见病学术大会征文(30)

1.首都医科大学附属北京安贞医院,北京市心肺血管疾病研究所

2.南华大学附属郴州市第一人民医院

温文慧1,2  江龙1 王绿娅1

通讯作者:王绿娅



目的:检测2 例植物固醇血症(STSL)先证者及其父母ABCG5/ABCG8基因突变检测血脂和植物固醇水平, 探讨2个家族STSL可能发病分子机制。

方法:收集先证者及其家系成员空腹外周血标本,按医院常规方法用血脂分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、载脂蛋白-A(APO-A)、载脂蛋白-B(APO-B)和脂蛋白 α(LPα)。植物固醇测定,应用GPC Cleanup system凝胶色谱净化浓缩联用系统对血浆样品进行分离、纯化,取血浆样品,加入内标物混合后 90%乙醇加热进行水解皂化。235nm的波长下测定紫外吸收值利用液相色谱检测植物固醇水平。提取患者基因组DNA 将符合质检的基因组DNA每个样品取100ng进行文库构建,利用covarisS2将DNA片段打断为200bp-500bp的小片段,进行末端修复,加‘A’碱基延伸及接头(adapter)连接,捕获前进行非捕获的连接介导PCR,纯化后的文库与已设计好的Agilent液相杂交巧片进行杂交,捕获序列,杂交产物纯化后分别加入不同的barcode进行捕获连接介导PCR,再次纯化后使用Life的Qubit和安捷伦2100对文库的浓度和片段大小进行定量。通过质检的文库在cBOT上进行簇生成后直接放入迅seq2000平台进行测序。核苷酸序列分析结果与GenBank 比对寻找突变;采用PCR-DNA 测序技术检测 LDLR,apoB100,LDLRAP1,PCSK9基因, 以排除家族性高胆固醇血症和家族性apoB100 缺陷症。

结果:2例植物固醇血症患者均存在升高的植物固醇水平和血脂水平,其父母血脂及植物固醇水平正常。家系1先证者在ABCG8基因存在het c.C490T(p.R164x)和het:c.1707_1709del(p569-570del)复合杂合突变,突变基因分别来自父亲和母亲,两个突变位点均报道过与植物固醇血症相关;家系2先证者为c.G694+5C(splicing)纯和突变,该突变在HGMD专业版数据库中未见报道。经家系验证分析,受检人之父该位点杂合变异,受检人之母该位点杂合变异。该变异临床意义未明可能与该患者发病相关。2例家系均未检测出患者及其家系LDLR,apoB100,LDLRAP1,PCSK9突变。

结论:2例先证者父母均为杂合患者,其血脂水平和植物固醇水平均正常。先证者血脂水平和植物固醇水平均较正常值明显升高。先证者1存在ABCG8基因het c.C490T(p.R164x)和het:c.1707_1709del(p569-570del)复合杂合突变, 为该家系中家族性高胆固醇血症的致病原因; 先证者2为c.G694+5C(splicing)纯和突变,该突变在HGMD专业版数据库中未见报道,可能为患者植物固醇发病原因。

本研究受国家自然科学基金资助