第十二届北京罕见病学术大会暨2024京津冀罕见病学术大会（102）

北京大学第一医院 儿科1

首都医科大学附属北京儿童医院2

罗继航1，刘艺丹1，杨诗淇1，宋丹羽1，

范燕彬1，王静敏1*，熊晖2*

通讯作者：熊晖

目的：ISPD基因（OMIM: 614631）编码胞苷二磷酸核糖醇合成酶（CDP-L-ribitol pyrophosphorylase A），是抗肌萎缩相关糖蛋白病（dystroglycanopathy，DGP）的致病基因之一。本课题组前期研究发现ISPD基因6-9号外显子缺失为始祖突变，为了探究ISPD exon 6-9缺失对ISPD酶活性的影响和导致DGP发生的机制，构建ISPD exon 6-9缺失小鼠模型，对小鼠模型进行初步研究。

方法：利用CRISPR/Cas9技术构建ISPD exon 6-9缺失小鼠模型，对小鼠模型进行初步研究。

结果： （1）利用CRISPR/Cas9技术成功构建了ISPD exon 6-9缺失小鼠模型，分别在intron5和intron9设计了sgRNA，大片段敲除了小鼠的6-9号外显子，缺失后导致移码突变，敲除大小约47.5kb。（2）ISPD C端的WB和qPCR结果证实KO小鼠C端结构域缺失，证明该模型为C端缺失小鼠模型，ISPD N端的WB和qPCR结果证实C端敲除后，N端结构域不受影响。（3）α-DG的WB和免疫荧光染色证实KO小鼠为α-DG缺乏导致的先天性肌营养不良小鼠。（4）KO小鼠的电镜结果提示线粒体和内质网结构异常。

结论： 本文通过前期研究基础，构建了ISPD exon 6-9缺失小鼠模型，并对小鼠模型进行了初步研究。