第十一届北京罕见病学术大会暨2023京津冀罕见病学术大会征文(005)

 1国家儿童医学中心，首都医科大学附属北京儿童医院，血液病中心，儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室，儿科学国家重点学科，儿科重大疾病研究教育部重点实验室，

2 国家儿童医学中心，首都医科大学附属北京儿童医院，北京市儿科研究所，血液病中心，血液疾病研究室

 杨颖¹，王婵娟¹，崔蕾²，李娜²，廉红云¹，马宏浩¹，王冬¹，赵云泽¹，

张利平¹，张晴²，赵晓曦²，王天有¹*，张蕊¹*，李志刚²*

 目的：探究巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor，CSF1）及其受体CSF1R和mTOR调节相关蛋白（regulatory-associated protein of mTOR，Raptor）在儿童朗格罕细胞组织细胞增生症（Langerhans cell histioytosis，LCH）中的作用机制。

方法：通过酶联免疫吸附试验测定LCH初治患者、非活动性病变LCH患者、健康保健儿童的血清CSF1浓度。对BRAF 基因突变的LCH患者的组织标本进行多重免疫组化实验测定病变组织CSF1R和表达水平。通过western blot、免疫共沉淀法、酶联免疫吸附试验等探究CSF1R对Raptor的调控及相互作用。

结果：MS - RO⁺组的CSF1R平均荧光强度高于MS - RO^-组和SS组，CSF1R强阳性组的Raptor平均荧光强度同样高于CSF1R弱阳性组的Raptor平均荧光强度。疾病活动期LCH患儿血清CSF1水平（经log转换）显著高于健康对照组（t=2.212，P=0.033）和非活动期LCH患者（t’=5.017，P<0.001）。MS组血清CSF1水平（经log转换）显著高于健康对照组（t=2.373，P=0.025），但与SS组无显著差异（t=0.943，P=0.352）。100ng/mL的人重组CSF1刺激THP1细胞6小时内CSF1R表达水平先下降，6小时后逐渐上升，刺激12小时后CSF1R呈一过性过表达状态，至24小时基本恢复至正常水平。Raptor相对表达量的变化曲线与CSF1R相似，在CSF1刺激后Raptor相对表达量先下降后逐渐上升，但其表达水平最低点为刺激后3小时。10nM的mTOR抑制剂雷帕霉素处理THP1细胞使Raptor表达量降低，同时上调了CSF1R的表达；而5μM的CSF1R强效抑制剂GW2580处理THP1细胞使CSF1R和Raptor表达量均增加（P＜0.05）。CSF1R可以进入胞核内，并可能正向调节Raptor的表达；CSF1R与Raptor之间存在相互作用关系，但与mTOR无相互作用。CSF1刺激THP1细胞后，mTOR活性先一过性下降，然后再增高，至刺激后6小时达最高，刺激延长至12小时后基本降至正常水平；GW2580抑制THP1细胞6小时后，mTOR活性降低，抑制后再加入人重组CSF1刺激可使mTOR活性显著升高。

结论：LCH细胞的CSF1R表达水平与疾病严重程度相关，血清CSF1水平升高可能与LCH疾病活动有关。在THP1单核细胞中，Raptor可能作为下游蛋白受到上游CSF1R的正向调控。Raptor和CSF1R存在相互作用，CSF1R可能通过调控Raptor的表达量最终影响mTOR活性。

（图略）