第十二届北京罕见病学术大会暨2024京津冀罕见病学术大会征文(030)

王怡康，赵亚雯，刚蔷，郝洪军，高枫，邓健文  王朝霞，张巍，郑艺明，袁云

北京大学第一医院神经内科

通信作者：郑艺明

【摘要】

目的 抗核基质蛋白2（NXP2）抗体阳性皮肌炎（DM）是一组具有独特临床-病理表现的I型干扰素（IFN-I）病。在其他自身免疫性疾病中，循环细胞游离DNA（ccf-DNA）能够监测疾病活动性，也能够激活环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）-干扰素基因刺激因子（STING）通路，触发IFN-I的产生。我们旨在探索抗NXP2抗体阳性DM患者血清ccf-DNA的改变以及ccf-DNA-cGAS-STING-IFN-I通路的激活。

方法 我们检测了20例初治的抗NXP2抗体阳性DM患者、25例健康对照的血清ccf-mtDNA和ccf-nDNA水平，并与临床、病理指标进行相关性分析。利用转录组测序及生物信息学分析患者及对照组肌肉组织中cGAS-STING-IFN-I通路的变化，利用免疫荧光实验观察肌肉组织游离双链DNA与cGAS的定位，通过免疫印迹实验检测cGAS-STING通路关键分子的表达量变化，通过实时荧光定量聚合酶链式反应实验检测干扰素刺激基因的转录水平，从而计算IFN-I评分。在用患者和健康对照血清孵育小鼠成肌细胞后，通过免疫印迹实验检测cGAS-STING通路关键分子（磷酸化STING）的表达量变化，利用实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测干扰素刺激基因15的转录水平。分别用降解ccf-DNA的脱氧核糖核酸酶I和STING拮抗剂（H-151）进行干预，观察患者血清孵育细胞后磷酸化STING和干扰素刺激基因15的表达量变化。

结果 与健康对照相比，抗NXP2抗体阳性DM患者的血清ccf-mtDNA水平和ccf-nDNA水平均显著升高（均P<0.001）。血清ccf-mtDNA水平与MYOACT评分呈正相关（ρ=0.458， P=0.042），血清ccf-nDNA水平与MMT8评分呈负相关（R=-0.552， P=0.012）。转录组学结果显示与对照组比，抗NXP2抗体阳性DM患者胞浆DNA识别信号通路和IFN-I通路显著上调。免疫荧光结果显示与对照组比，抗NXP2抗体阳性DM患者肌细胞中游离双链DNA增多，并且与cGAS共定位。免疫印迹结果显示与未出现束周萎缩的抗NXP2抗体阳性DM患者、对照组相比，出现束周萎缩的患者cGAS-STING通路关键分子的蛋白表达量显著升高，实时荧光定量聚合酶链式反应结果进一步证实IFN-I评分升高。体外细胞实验结果显示，出现束周萎缩的患者血清可诱导细胞内磷酸化STING及干扰素刺激基因15的表达水平升高。在分别用脱氧核糖核酸酶I和H-151干预后，患者血清孵育细胞不能诱导该通路的活化。

结论 抗NXP2抗体阳性DM患者血清ccf-mtDNA和ccf-nDNA水平明显升高，可用于监测疾病活动性/严重程度，能够激活ccf-DNA-cGAS-STING-IFN-I通路。

【关键词】皮肌炎；抗核基质蛋白2；循环细胞游离DNA；cGAS-STING通路