第十二届北京罕见病学术大会暨2024京津冀罕见病学术大会征文(020)

温琪，张姝，王静思，王亚叶，笪宇威等

首都医科大学宣武医院 神经内科

背景与目的：

重症肌无力是T细胞依赖、抗体介导和补体参与的自身免疫性疾病，其发病机制的始动环节尚未完全阐明，目前认为可能与固有免疫激活形成的慢性炎症环境有关。近年来，血小板在固有免疫中的研究不断涌现，逐渐被视为免疫系统的重要组成部分。本研究旨在明确MG血小板的异常活化状态，探索其对辅助T细胞功能的影响及在MG异常免疫反应启动和维持中的作用，以期发现能够反应MG发病及病情加重的生物标志物，探索新的治疗靶点。

材料与方法：

对未经免疫治疗的新发MG患者及其经免疫治疗达到最小临床状态（MMS）后、健康对照（HC）的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）进行单细胞转录组测序，分析血小板转录组特征及其与其他免疫细胞的相互作用。通过流式细胞术、透射电镜和多因子检测等，研究MG患者疾病活动期外周血血小板数量、活化水平、形态学改变及血小板-白细胞聚集体的形成；通过体外细胞共培养研究血小板对幼稚CD4+ T细胞（naïve CD4+ T cell，Tn）增殖及分化的影响。

结果：

单细胞转录组测序数据分析显示，在MG患者疾病活动期，外周血血小板数量增加且异常活化，脱颗粒相关基因表达水平升高，与髓系细胞形成聚集体增加。在验证队列中，通过流式细胞术证实了MG血小板过度活化，CD62P阳性血小板、血浆中可溶性CD40L（soluble CD40 ligand，sCD40L）及血小板-白细胞聚集体水平均升高，且与疾病严重程度相关。经免疫治疗达到MMS后的MG患者外周血血小板数量、脱颗粒相关基因表达、活化标志物水平及血小板-中性粒细胞聚集体显著降低。进一步研究发现，活动期MG患者血小板具有显著促炎作用，能够促进T细胞增殖和1型辅助T细胞（type 1 T helper cell，Th1）相关细胞因子的分泌，抑制调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）相关因子Foxp3的分泌；相比之下，MMS患者血小板促炎能力明显下降。

结论：

血小板的活化状态能够反映MG疾病的活动性，可作为MG发病和病情加重潜在的生物标志物；活化血小板可能是MG异常免疫反应的重要参与者，对探索新的治疗靶点具有重要意义。

关键词：重症肌无力、血小板活化、固有免疫、单细胞转录组测序